產品名稱:Bst DNA Polymerase, Large Fragment
中文名稱:Bst DNA聚合酶,大片段
產品編號與包裝規格:
編號 | 產品名稱 | 規格 | 產品介紹 | 產品價格 |
HKE015-02B | Bst DNA Polymerase, Large Fragment | 800U×5 | Bst DNA聚合酶,大片段 |
產品描述:Bst DNA聚合酶大片段是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分,來源于E.coli菌株。利用基因重組技術,在大腸桿菌中進行表達后經多次純化分離而得。該酶具有5′→3′DNA聚合酶活性, 但不具有5′→3′外切核酸酶活性。本制品可應用于DNA測序、DNA 標記和等溫DNA擴增等。
產品特點:
鏈置換活性強。
高靈敏度。
樶佳活性溫度為 65℃,恒溫擴增,無需熱循環儀。
產品用途:
1)富含 GC 序列的 DNA 序列測定;
2)微量(納克量)DNA 模板的快速測序;
3)隨機引物 DNA 標記;
4)雙鏈 DNA 5'突出端補平法標記;
5)可用于等溫 DNA 擴增,如環介導等溫擴增(LAMP),全基因組擴增(WGA),解旋酶恒溫基因擴增(HDA)等。
應用實例:圖例)Bst DNA 聚合酶大片段用于LAMP 實驗,以 M13 ssDNA 為模板, 以 F3/B3,FIP/BIP 為引物,65℃反應1 小時后,進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。
泳道M:1kb DNA Ladder ;
泳道 1:LAMP 擴增產物。
反應體系(25μL)如下:
10×Bst LF Buffer | 2.5μL |
F3/B3 | 0.2μM(終濃度) |
FIP/BIP | 0.8μM(終濃度) |
甜菜堿 | 1M(終濃度) |
dNTPs | 400μM(終濃度) |
M13 ssDNA 模板 | 2μL |
Bst DNA 聚合酶Large Fragment | 1μL(8U) |
ddH2O | 至 25μL |
保存溫度:-20℃。
產品包裝(A 包裝):
質量保證:經多次柱純化,SDS-PAGE 膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶,qPCR 方法檢測無大腸桿菌 DNA 殘留,無核酸內、外切酶污染。
活性定義:65℃條件下,30分鐘內使10nmol的dNTPs摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個活性單位。
10×反應緩沖夜:200mM Tris-HCl,100mM (NH4)2SO4,500mM KCl,20mM MgSO4,1% Tween 20,pH8.8。
保存體系:50 mM KCl,10 mM Tris-HCl (pH 7.5),1mM DTT, 0.1 mM EDTA,0.1% Triton X-100 和 50% Gly1cerol。
反應條件:1×反應緩沖夜,65℃溫浴。
熱失活:80℃,10 分鐘。
注意事項:
1)Bst DNA 聚合酶不具有 3′→5′外切酶活性;
2)長期貯存需加入 100μg/mL BSA 或 0.1% Triton X-100;
3)建議反應溫度不要超過 70℃;
4)Bst DNA 聚合酶不能用于熱循環測序或PCR。